PHÂN TÍCH KIỂU GEN HPV 11 BẰNG MULTIPLEX PCR VỚI MÁY GEXP
Nghiên cứu này được thực hiện bởi nhà khoa học tại phòng thí nghiệm trọng điểm Virus học phân tử và kĩ thuật gen của viện kiểm soát và ngăn chặn bệnh dịch quốc gia, Bắc Kinh, Trung Quốc
Đây là một phương pháp mới, nhanh, nhạy và năng suất cao được phát triển để phát hiện đồng thời HPV11, 9 típ nguy hiêm khác ( HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 52, 58 và 66) và cả 2 típ có độ nguy hiểm thấp hơn ( HPV6 và 11) trong 1 tube duy nhất bằng multiplex PCR bằng máy phân tích gen đa năng GeXP. Mười một bộ mồi khảm ( chimeric primer) được dùng để PCR bước đầu, và một cặp mồi chung cho bước PCR tiếp theo. Điều đặc biệt hơn với GeXP-PCR là mỗi típ HPV đã được khảo sát bằng mẫu bệnh trước đó kể cả về độ nhạy.
1. PHÂN LOẠI HPV
HPV là một nhóm có vật chất di truyền là DNA mạch đôi, có nhiều típ khác nhau và thuộc họ Papovaridae. Là một tác nhân gây ung thư cho phụ nữ đứng thứ hai trên thế giới. Ngoài ra HPV loại độc cũng là nguyên nhân gây ung thư âm đạo, ung thư âm hộ, ung thư hậu môn, ung thư dương vật, ung thư đầu và cổ. Có khoảng 100 loại HPV, trong 40 loại gây bệnh ở cơ quan sinh dục con người, có 15 loại được liệt vào hạng “độc” tạo nguy cơ cho sức khỏe. Hai loại thông thường nhất là HPV-16 và HPV-18 có khả năng nhiễm sâu vào cổ tử cung phụ nữ (3-10%), sau đó làm thay đổi mô tử cung và gây bệnh ung thư cổ tử cung. Loại ít độc hơn, HPV-6 và HPV-11, có thể gây 90% chứng mụn cóc (mào gà) của cơ quan sinh dục. Loại nhẹ gây chứng mụn cóc ở tay là (HPV-2) và bàn chân là (HPV-1).
Phát hiện DNA HPV và xác định loại HPV rất quan trọng đối với nghiên cứu lịch sử tự nhiên của HPV, phát triển vắc xin và chăm sóc bệnh nhân. Hơn nữa, xác định kiểu gen của HPV để nghiên cứu các triệu chứng lâm sàng và dịch tể học của các trường hợp nhiễm HPV, dùng thử vắc xin… Có vài phương pháp để xác định kiểu gen của HPV như dùng probe trực tiếp với Southern blot và lai in-situ, các phương pháp khuếch đại tín hiệu HC2 (hydrid capture II), và phương pháp PCR. Các phương pháp này có độ đặc hiệu, độ nhạy, độ phức tạp và chi phí khác nhau. Một phương pháp mới để xác định kiểu gen của HPV, được tiến hành trên GeXP để phân tích sản phẩm PCR dựa trên kích thước bằng ống điện di mao quản và đọc kết quả qua tín hiệu huỳnh quang. Hệ thống phân tích gen GeXP của Beckman Coulter với năng suất cao, mạnh mẽ và kết quả rõ ràng cho multiplex đến 35 gen trong 192 mẫu ở 1 lần phân tích [Rai et al., 2009]. Kết quả sản phẩm PCR được phân tích bởi phần mềm GenomLab. Điểm mạnh của GeXP – PCR là độ nhạy và độ hiệu cao hơn với các phương pháp multiple khác.
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
- Mẫu bệnh
- Tách chiết DNA
- Thiết kế mồi GeXP-PCR
- Chạy GeXP-PCR và phát hiện
- Độ nhạy và độ đặc hiệu của GeXP-PCR
- Đánh giá kết quả
3. KẾT QUẢ
4. THẢO LUẬN
Vào link sau để xem bài báo cụ thể http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22499019
Hoặc liên hệ với chúng tôi để nhận bài báo chi tiết