Năm 1975, César Milstein và Georges Köhler đã công bố một phương pháp để sản xuất số lượng không giới hạn các kháng thể giống hệt nhau. Bằng cách dung hợp tế bào B miễn dịch với tế bào u tủy, họ đã tạo ra các hybridoma—những dòng tế bào bất tử tiết ra một kháng thể đặc hiệu duy nhất vô thời hạn. Những kháng thể đơn dòng (mAbs) này, họ kết luận một cách khiêm tốn, “có thể có giá trị cho sử dụng trong y tế và công nghiệp” (1).

Tất nhiên, điều này hóa ra là một cách nói giảm. Vào năm 2025, các biên tập viên của tạp chí Nature đã viết rằng khám phá này đã “có một số tác động lớn nhất đối với khoa học và chăm sóc sức khỏe trong thời hiện đại” (2). Ngày nay, thị trường mAbs đã đạt 250 tỷ đô la và vẫn đang tiếp tục tăng, với hàng chục triệu bệnh nhân được điều trị. Và tác động còn vươn xa ra ngoài lĩnh vực y học. Như Nature đã ghi nhận, ngày nay mAbs là “công cụ làm việc chủ lực của các phòng thí nghiệm nghiên cứu” (2). Công nghệ cần thiết để sản xuất, tinh sạch và nghiên cứu chúng cũng vậy.

Điều đó đã xảy ra như thế nào? Nhiều người đã sớm nhận ra tiềm năng của mAbs, nhưng con đường phía trước, như Milstein đã nói trong bài giảng Nobel năm 1984 của ông, “đầy rẫy những cạm bẫy và khó khăn” (3). Một trong số đó không hề nhỏ là việc xây dựng một khối lượng kiến thức về cấu trúc và tương tác phân tử, cơ chế bệnh tật, và các đích thuốc mà mAbs có thể nhắm tới. Dù đáng chú ý đến đâu, khám phá của Milstein và Köhler cũng chỉ là một đỉnh núi trong một dãy núi trải dài qua sinh học cấu trúc, nghiên cứu protein, miễn dịch học, kỹ thuật cơ khí, thiết kế protein tính toán và sinh học phân tử—cùng nhiều lĩnh vực khác.

Cũng như không có hai cuộc thám hiểm leo núi nào giống hệt nhau, mỗi đột phá khoa học có một con đường riêng biệt. Điểm chung của tất cả chúng là sự phụ thuộc lẫn nhau: các cột mốc, một khi đã đạt tới, sẽ trở thành những bậc đá bước tiếp. Bài báo năm 1975 của Milstein và Köhler vừa là đỉnh cao của—vừa là điểm khởi đầu cho—hàng thập kỷ của những hiểu biết sâu sắc và tiến bộ công nghệ. Sau đây chúng ta sẽ nhìn lại một số điểm nổi bật.

Những chỗ đặt chân ban đầu: sự trỗi dậy của sinh học phân tử và khoa học protein

Câu chuyện của chúng ta bắt đầu sau một cuộc cách mạng khoa học đã đặt các phân tử sinh học vào vị trí trung tâm. Giữa năm 1940 và 1965, một loạt các khám phá đã đặt nền móng cho sinh học phân tử. Các nhà nghiên cứu đã xác định rằng DNA mang thông tin di truyền và khám phá ra mối quan hệ trực tiếp giữa gen và protein. Những hiểu biết này đã đạt đến đỉnh cao với sự mô tả luận thuyết trung tâm: dòng thông tin di truyền từ DNA sang RNA rồi đến protein.

Những bước nhảy vọt về mặt khái niệm này được thúc đẩy bởi đổi mới công nghệ. Tinh thể học tia X đã tiết lộ cấu trúc phân tử ba chiều; siêu ly tâm cho phép phân tách protein tinh tế hơn theo kích thước và mật độ; điện di phân biệt protein và axit nucleic theo kích thước và điện tích.

Làn sóng tiến bộ tiếp theo—tạo ra các phân tử DNA tái tổ hợp đầu tiên vào năm 1972 (4), mAbs có nguồn gốc từ hybridoma của Milstein và Köhler năm 1975, và insulin người tái tổ hợp năm 1978—đã mở ra nhiều con đường hơn nữa. Nhưng con đường leo lên trở nên dốc hơn. Insulin tái tổ hợp vẫn phải được tách khỏi các chất gây ô nhiễm tế bào. mAbs từ hybridoma chuột nhắt hoặc chuột cống khó sản xuất và có nguy cơ gây tác dụng phụ nghiêm trọng ở người. Tương tự, việc nghiên cứu enzyme, thụ thể và các protein khác phụ thuộc vào việc phân lập chúng khỏi các hỗn hợp phức tạp. Công nghệ tinh sạch protein có thể giúp giải quyết những vấn đề này, nhưng những hạn chế của nó đã làm chậm tiến độ.

Các chiến lược tinh sạch ban đầu như kết tủa bằng dung môi hoặc muối và siêu ly tâm, nhiều phương pháp vẫn được sử dụng cho đến ngày nay, đóng vai trò quan trọng. Nhưng chúng có thể chậm, và hiệu suất cũng như độ tinh khiết có thể thay đổi rất lớn giữa các lần chạy. Sắc ký lỏng có thể hữu ích ở đây. Trong kỹ thuật này, các chất phân tích trong một pha động (chẳng hạn như dịch nổi nuôi cấy tế bào) di chuyển qua một pha tĩnh bao gồm các hạt hoặc vi cầu đã được đóng gói. Những vi cầu này tách phân tử quan tâm ra khỏi phần còn lại của dịch nổi khi nó đi qua. Điều này có thể xảy ra bằng cách loại trừ theo kích thước (nơi các phân tử quá lớn để đi qua sẽ bị mắc kẹt trong các vi cầu), bằng ái lực (nơi các phân tử liên kết với một phối tử được gắn vào các vi cầu), hoặc bằng các cơ chế khác. Dù cơ chế là gì, kết quả đều giống nhau: tách protein quan tâm ra khỏi hỗn hợp. Các hệ thống ban đầu dựa vào trọng lực để kéo pha động đi qua, dẫn đến các quá trình phân tách chậm, khó tái lập và thường có độ phân giải thấp (6)—đây không phải là nền tảng lý tưởng cho các nhà nghiên cứu đang cố gắng giữ gìn các phân tử sinh học còn nguyên vẹn.

Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), xuất hiện vào những năm 1960 và 1970 (7,8), là một phương tiện để tách các phân tử nhanh hơn và chính xác hơn. Bằng cách kết hợp bơm áp suất cao với kích thước hạt nhựa nhỏ, HPLC cung cấp khả năng phân tách nhanh hơn, có kiểm soát hơn với độ phân giải được cải thiện đáng kể. Nhưng áp suất cao của nó (hàng chục đến hàng trăm bar) và việc sử dụng dung môi hữu cơ có thể làm biến tính các phân tử sinh học nhạy cảm. Đối với các nhà nghiên cứu đang hướng tới việc phân lập các protein còn nguyên vẹn, có chức năng—như các protein của các liệu pháp mAbs trong tương lai—cần một con đường nhẹ nhàng hơn.

Một con đường dốc thoải hơn: phân tách cho các phân tử nhạy cảm

Mục tiêu của các nhà khoa học tại Pharmacia Fine Chemicals (nay là Cytiva) ở Uppsala, Thụy Điển, bắt đầu từ năm 1975, là tạo ra một giải pháp thay thế tương thích sinh học cho HPLC. Họ tìm kiếm một hệ thống bảo toàn được độ phân giải cao của HPLC trong khi vẫn bảo vệ các phân tử sinh học mỏng manh.

Sau bảy năm nghiên cứu, thử nghiệm chuyên sâu và các lần phát hành mô-đun gia tăng, hệ thống FPLC hoàn chỉnh đầu tiên đã ra mắt. Ban đầu được đặt tên là sắc ký lỏng hiệu năng nhanh (FPLC) để phân biệt với HPLC, đây là hệ thống tích hợp đầu tiên trên thế giới được thiết kế đặc biệt cho sắc ký điều chế. Trong khi HPLC tập trung vào nhận dạng phân tích, FPLC được tạo ra rõ ràng cho mục đích tinh sạch sinh học.

FPLC cho phép phân tách các đại phân tử lớn ở áp suất nhẹ nhàng (<5 bar). Các cột được đóng gói bằng vi cầu agarose liên kết chéo cung cấp đường kính hạt lớn hơn, cho phép tốc độ dòng cao hơn so với các phương pháp phân tách dựa trên trọng lực, ở áp suất vẫn đủ thấp để bảo toàn mẫu còn nguyên vẹn.

Đạt được độ cao với FPLC

Một khi các nhà nghiên cứu đã có công cụ mới này trong hành trang của họ, tiến độ đã được đẩy nhanh. Ngay từ năm 1985, các công bố mang tính bước ngoặt đã sử dụng FPLC để tinh sạch protein (9,10). Ví dụ, Bruce Beutler đã mô tả trong bài giảng Nobel của mình về sự khó khăn trong việc bảo toàn cấu trúc bậc một của cachectin chuột được tinh sạch từ môi trường đã qua điều kiện hóa bởi đại thực bào. Ông đã chuyển sang sử dụng hệ thống FPLC của Pharmacia để phát triển phương pháp cuối cùng đã cho ra trình tự axit amin chính xác (9). Trình tự này tiết lộ rằng cachectin là ortholog ở chuột của yếu tố hoại tử khối u ở người (TNF), một hiểu biết tỏ ra là nền tảng cho công trình mà Beutler đã giành giải Nobel vào năm 2011.

Hệ thống FPLC nhanh chóng trở thành một công cụ đa năng trong nhiều lĩnh vực, tinh sạch mọi thứ từ yếu tố tăng trưởng tế bào B (11) và mAbs (12,13) đến các phân tử tín hiệu tế bào thực vật (14). Nó đã hỗ trợ công trình then chốt của các nhà nghiên cứu như Steven McKnight (15), Franz Ulrich Hartl (16), và những người khác (17), những người đã dựa vào FPLC để phân lập protein liên kết nhân, enzyme liên quan đến cuộn gập, và nucleotide. FPLC hoạt động như một sợi dây bảo hiểm chắc chắn cho các dự án này, hỗ trợ tiến độ đi lên vững chắc trên những địa hình khoa học vô cùng đa dạng.

Một cuộc thám hiểm táo bạo: leo lên Núi Ribosome

Trong suốt giai đoạn này, một nhiệm vụ toàn cầu đầy tham vọng khác đang được tiến hành: giải cấu trúc ribosome ở độ phân giải nguyên tử. Ribosome—ở vi khuẩn, là một phức hợp RNA-protein khổng lồ khoảng 2,5 triệu Da—rất cần thiết cho việc dịch mã thông tin di truyền. Nó cũng là một đích thuốc quan trọng. Hơn một nửa số kháng sinh lâm sàng liên kết với ribosome, và việc giải được cấu trúc nguyên tử sẽ cho phép thiết kế các loại thuốc mới.

Tuy nhiên, việc kết tinh ribosome đặt ra những thách thức phi thường. Như một trong những nhà nghiên cứu sau này đã nói, “ý tưởng kết tinh ribosome là hoàn toàn táo bạo điên rồ” (18). Nhưng đã có tiến bộ. Ada Yonath tại Viện Khoa học Weizmann ở Israel đã có được chỗ đứng vào năm 1980, giải quyết vấn đề độ phân giải thấp ở các ribosome đã được tinh sạch. Các nhóm khác, bao gồm Thomas Steitz tại Yale và Venkatraman Ramakrishnan tại Phòng thí nghiệm Sinh học Phân tử MRC ở Cambridge, đã leo lên cao hơn nữa, thu được các tinh thể nhiễu xạ ở mức 7–9 Å vào cuối những năm 1990 (19).

Như Ada Yonath đã nói với Ủy ban Nobel vào năm 2009: “Điều chúng tôi cảm thấy là chúng tôi đang leo lên những ngọn núi để đạt đến đỉnh cao nhất—và những ngọn núi này giống như Everest, ngọn núi lớn nhất khó leo nhất—chỉ để nhận ra rằng có một ngọn núi khác đang chờ phía sau để được leo tiếp sau đó” (20).

Tinh sạch không phải là thách thức lớn nhất trong cuộc thám hiểm này, mà thay vào đó là một trong những trại căn cứ. Ribosome rất dễ vỡ và dễ bị phân rã khi chịu ứng suất trượt hoặc điều kiện muối không phù hợp. Tinh thể học đòi hỏi các tiểu đơn vị ribosome có độ tinh khiết cao, đồng nhất ở nồng độ cao—không có nuclease và protease. Công cụ được lựa chọn cho công việc này là FPLC sử dụng tương tác kỵ nước.

Vào năm 2000, sau nhiều thập kỷ tiến bộ dần dần, ba nhóm đã lên đến đỉnh. Nhóm của Steitz đã giải được tiểu đơn vị 50S, nhóm của Yonath độc lập giải được tiểu đơn vị 50S, và phòng thí nghiệm của Ramakrishnan giải được tiểu đơn vị 30S (18). Nỗ lực này là một kiệt tác về công nghệ, mang về cho Ramakrishnan, Steitz và Yonath giải Nobel Hóa học năm 2009.

Đến lúc đó, FPLC đã giành được vị trí của mình trong số các công nghệ hỗ trợ then chốt. Khi các nhà khoa học tiếp tục tìm ra những cách tài tình để tận dụng công nghệ này, hệ thống FPLC của Pharmacia cũng đang phát triển để giúp việc tinh sạch dễ tiếp cận hơn với nhiều người dùng hơn.

Những tuyến đường mới và những đỉnh núi cao dần: các cuộc thám hiểm vào khám phá

Một khi một đỉnh núi đã được chinh phục, những đỉnh núi mới lại hiện ra. Khi sinh học cấu trúc mở rộng, FPLC vẫn giữ vai trò trung tâm. Roderick MacKinnon đã sử dụng FPLC để tinh sạch protein liên kết cho tinh thể học (21), công trình đã mang lại cho ông giải Nobel Hóa học năm 2003 vì đã làm sáng tỏ cấu trúc và chức năng kênh ion. Sự hiểu biết này đã đặt nền tảng cho việc hiểu và điều trị các bệnh liên quan đến rối loạn chức năng kênh ion, chẳng hạn như rối loạn nhịp tim, rối loạn thần kinh và rối loạn tự miễn. Công nghệ FPLC đã hỗ trợ tinh sạch cho các nghiên cứu về yếu tố phiên mã (22), sinh học ty thể (23), viêm gan C (24), và các cơ chế enzyme độc đáo (25).

Việc tinh sạch protein cho các ứng dụng sau đó trở nên quan trọng không kém việc tinh sạch chúng để phân tích cấu trúc. Frances Arnold đã tiên phong trong lĩnh vực tiến hóa định hướng vào những năm 1990 và 2000 (26), tạo ra các enzyme có chức năng mới hoặc được tăng cường. Công trình đoạt giải Nobel của bà có tính nền tảng trong khoa học sự sống và trong phát triển và sản xuất thuốc. Ví dụ, trong sản xuất dược phẩm, tiến hóa định hướng đã được sử dụng để tối ưu hóa các sản phẩm thuốc và quy trình sản xuất của chúng nhằm cải thiện hiệu quả và độ an toàn. Sir Gregory P. Winter, người cùng nhận giải Nobel Hóa học với Arnold năm 2018, đã sử dụng tiến hóa định hướng trên protein để phát triển các liệu pháp sinh học. Tiến hóa định hướng ngày nay được sử dụng thường xuyên để thay đổi các dược phẩm sinh học nhằm tăng độ hòa tan, khả năng tinh sạch, hoặc độ ổn định, và giảm tính sinh miễn dịch. Thuốc đầu tiên được bán trên thị trường được phát triển thông qua phương pháp này là adalimumab, được phê duyệt vào năm 2002 cho bệnh viêm khớp dạng thấp và các tình trạng tự miễn khác (26).

Việc hiện thực hóa tiềm năng của các enzyme và protein được thiết kế kỹ thuật đòi hỏi, như bất kỳ cuộc thám hiểm nào, những công cụ phù hợp cho công việc. Khả năng mở rộng quy mô là chìa khóa, và điều đó đòi hỏi phải tinh sạch có thông lượng cao, có thể dự đoán được các phân tử mục tiêu, sử dụng một phương pháp không làm gián đoạn chức năng của chúng. Ở đây một lần nữa, FPLC là phương pháp được nhiều nhà khoa học lựa chọn (27–29).

Đến lúc này, công nghệ FPLC đã trở nên tinh vi hơn. Việc tinh sạch có thể được tự động hóa thông qua các hệ thống như hệ thống sắc ký SMART của Pharmacia, được giới thiệu vào năm 1990, và phiên bản tiếp theo của nó, hệ thống ÄKTAexplorer, ra mắt năm 1996. Tự động hóa và việc tiêu chuẩn hóa phần mềm điều khiển đã mở rộng hơn nữa năng lực của các nhà khoa học, cho phép họ tận dụng thông lượng cao hơn, các giao thức đơn giản hóa và kết quả có tính tái lập cao hơn.

Chinh phục điều không thể: nhóm CRISPR tấn công đỉnh cao

Vào năm 2012, thế giới biết đến CRISPR-Cas9, một hệ thống miễn dịch của vi khuẩn được tái sử dụng thành công cụ chỉnh sửa gen, và sinh học đã không còn như trước kể từ đó. Nhưng đây là một cuộc leo núi đầy thử thách đòi hỏi độ chính xác kỹ thuật cao. Ý tưởng cơ bản rất táo bạo: liệu các nhà nghiên cứu có thể thiết kế một hệ thống trong đó protein vi khuẩn (Cas9), được dẫn đường bởi một RNA nhỏ, có thể cắt DNA tại một vị trí mong muốn hay không? Nếu có, nó sẽ cung cấp một cách dễ dàng để chỉnh sửa bộ gen.

Jennifer Doudna và Emmanuelle Charpentier đã dẫn đầu cuộc leo núi này (30,31). Những công cụ họ sử dụng trên đường đi không hào nhoáng, nhưng chúng đáng tin cậy. Công việc liên quan đến việc biểu hiện quá mức Cas9 trong E. coli và tinh sạch nó bằng cách sử dụng một quy trình sắc ký nhiều bước. Các thành phần RNA được tổng hợp bằng phiên mã in vitro và được tinh sạch (thường bằng sắc ký). Khi họ trộn Cas9 đã tinh sạch với crRNA và tracrRNA và một DNA đích, họ thấy một vết cắt chính xác tại vị trí mong đợi.

Khả năng dễ dàng cắt DNA tại các vị trí được chọn, một khi được chứng minh, đã gây ra một trận tuyết lở. Như Doudna sau này đã nói, “Chúng tôi có cảm giác trong những ngày rất sớm đó, trong công việc của tôi với Emmanuelle, rằng… chúng tôi đang phát hiện ra điều gì đó lớn lao, nhưng tôi nghĩ chúng tôi không biết nó lớn đến mức nào” (32). Trong vòng vài tháng, một số nhóm đã chỉ ra rằng CRISPR-Cas9 có thể chỉnh sửa gen bên trong tế bào động vật có vú sống. Sự đơn giản của hệ thống đã làm cho nó dễ tiếp cận với nhiều phòng thí nghiệm, dẫn đến vô số tiến bộ: tạo ra các mô hình bệnh tật, kỹ thuật cây trồng, phát triển các liệu pháp mới (liệu pháp gen dựa trên CRISPR đã cho thấy hứa hẹn điều trị các bệnh di truyền trong các thử nghiệm lâm sàng). Thật khó để cường điệu hóa tác động của CRISPR. Nhưng không điều gì trong số này có thể xảy ra nếu Charpentier và Doudna trước tiên không chứng minh được hóa sinh học hoạt động. Và bằng chứng đó dựa trên các công cụ chuyên ngành: không chỉ FPLC, mà còn cả bộ dụng cụ tạo dòng gen, vector biểu hiện, và các cột và giao thức tinh sạch để thu được Cas9 có hoạt tính.

Mang những khám phá xuống núi: mở rộng quy mô khoa học thành y học

Ở những nơi khác, những người leo núi đang tiến hành nghiên cứu miễn dịch học sẽ tạo tiền đề cho các liệu pháp miễn dịch hiện đại. Công việc này cũng phụ thuộc vào việc phân lập các thụ thể, phân tử tín hiệu và kháng thể (33,34). Các nền tảng tinh sạch ngày càng trở nên quan trọng trong sản xuất kháng thể, hỗ trợ mAbs điều trị (35), kháng thể đặc hiệu kép (36), và liên hợp kháng thể-thuốc (ADC) (37).

Nhưng việc đạt đến đỉnh núi chỉ là một nửa hành trình; mang những khám phá trở lại an toàn cho bệnh nhân có thể còn khó khăn không kém. Các hệ thống tinh sạch tỏ ra không thể thiếu trong sản xuất sinh học cũng như trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu. Các nền tảng FPLC đã trở thành công cụ nền tảng trong chế biến sinh học công nghiệp, cho phép các quy trình làm việc từ quy mô phòng thí nghiệm đến quy mô sản xuất. Khả năng mở rộng quy mô của công nghệ hỗ trợ, như các hệ thống ÄKTA™ ngày nay có mặt khắp nơi trong các phòng thí nghiệm và khu vực sản xuất, đã giúp chuyển giao các giao thức một cách liền mạch vào môi trường sản xuất. Những nền tảng như vậy đã hỗ trợ tinh sạch mAbs (38,39), kháng thể đặc hiệu kép (40), protein tái tổ hợp (41,42), yếu tố tăng trưởng (43), và các dược phẩm sinh học khác (44). Các hệ thống FPLC ban đầu đã góp phần phát triển rituximab, mAb đầu tiên được phê duyệt cho điều trị ung thư và là liệu pháp điều trị ung thư nhắm mục tiêu tế bào B đầu tiên (38).

Tinh sạch axit nucleic cũng chuyển đổi nhanh chóng. Trong quá trình phát triển vắc-xin mRNA vào những năm 2010, các nhóm do Katalin Karikó và Drew Weissman dẫn đầu đã sử dụng hệ thống ÄKTA™ để sản xuất mRNA cho các nghiên cứu tiền lâm sàng và nghiên cứu hạt nano lipid (45–48). Trong đại dịch COVID‑19, việc sản xuất mRNA tinh sạch toàn cầu đòi hỏi phải mở rộng quy mô chưa từng có—một nỗ lực được thực hiện khả thi một phần nhờ vào các hệ thống sắc ký được thiết kế để leo dốc trơn tru từ quy mô phòng thí nghiệm đến sản xuất quy mô lớn.

Quan sát đường sống núi tiếp theo

Trong kỷ nguyên của sinh học tổng hợp và tính toán—nơi học máy thiết kế các enzyme mới và trí tuệ nhân tạo dự đoán cấu trúc protein—các hệ thống ÄKTA™ tiếp tục đóng vai trò là cầu nối giữa thiết kế in silico và xác nhận trong thế giới thực. Chúng giúp đảm bảo rằng các cấu trúc tổng hợp không chỉ khớp với dự đoán mà còn hoạt động như mong muốn.

Người đoạt giải Nobel David Baker đã sử dụng các hệ thống ÄKTA™ để tinh sạch các protein được thiết kế bằng thuật toán (49,50). Tương tự, các nhà nghiên cứu tại Google đã dựa vào hệ thống ÄKTA pure™ để xác nhận hoạt tính của các protein được tạo ra bằng hệ thống học máy AlphaProteo của họ (51). Quả thực, các công cụ thiết kế protein de novo như AlphaFold và RFdiffusion sẽ không thể có được nếu không có FPLC. Những mô hình như vậy được huấn luyện trên dữ liệu cấu trúc protein do cộng đồng nghiên cứu tạo ra trong vài thập kỷ qua. Ngân hàng Dữ liệu Protein, tính đến tháng 2 năm 2026, chứa gần 250.000 cấu trúc protein được xác định bằng thực nghiệm (52). Hầu hết trong số này đã được tinh sạch bằng FPLC.

Thật không thể nói, khi đứng trên đỉnh một ngọn núi, rằng một đoạn đường cụ thể nào đó quan trọng hơn bất kỳ đoạn nào khác. Trong khung cảnh của những đỉnh cao khoa học này, mỗi bước đi đều xuất phát từ hàng thập kỷ của hiểu biết sâu sắc, sự bền bỉ và những đổi mới trước đó. Tuy nhiên, khi các nhà khoa học sẵn sàng vươn lên, các công cụ tinh sạch trong tay họ thường quyết định họ có thể leo bao xa và an toàn đến mức nào. Từ những hybridoma đầu tiên đến các protein do AI thiết kế ngày nay, các hệ thống như FPLC và hệ thống sắc ký ÄKTA™ đã giúp biến những hiểu biết sâu sắc thành những đột phá, và những đột phá thành các liệu pháp điều trị. Khi những thách thức mới xuất hiện ở phía chân trời, những công nghệ này sẽ tiếp tục giữ vững bước leo.

Tài liệu tham khảo

1. Köhler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.Nature. 1975;256(5517):495-497.
2. Monoclonal antibodies revolutionized biomedical science and health care. Nature. 2025;644(8076):305. doi:10.1038/d41586-025-02452-7
3. Milstein C. From the structure of antibodies to the diversification of the immune response. Nobel lecture, 8 December 1984. Biosci Rep. 1985;5(4):275-297. doi:10.1007/BF01116899
4. Jackson DA, Symons RH, Berg P. Biochemical method for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40: circular SV40 DNA molecules containing lambda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli. Proc Natl Acad Sci. 1972;69(10):2904-2909.
5. Fallon A, Booth RFG, Bell LD, eds. Chapter 1 The Origins and development of liquid chromatography. In: Applications of HPLC in Biochemistry. Vol 17. Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. Elsevier; 1987:1-7. doi:10.1016/S0075-7535(08)70363-2
6. Giddings JC. Dynamics of Chromatography: Principles and Theory. CRC Press; 2017.
7. Karger BL, Berry LV. Rapid liquid-chromatographic separation of steroids on columns heavily loaded with stationary phase. Clin Chem. 1971;17(8):757-764.
8. Beutler B. How mammals sense infection: From endotoxin to the Toll-like receptors: Nobel Lecture, December 7, 2011. In: Nobel Lectures Including Presentation Speeches And Laureates’ Biographies: Physiology Or Medicine (2011-2015).
9. World Scientific Publishing Co. Pte Ltd; 2022:34-78. Beutler B, Greenwald D, Hulmes JD, et al. Identity of tumour necrosis factor and the macrophage-secreted factor cachectin. Nature. 1985;316(6028):552-554.
10. Hirano T, Taga T, Nakano N, et al. Purification to homogeneity and characterization of human B-cell differentiation factor (BCDF or BSFp-2). Proc Natl Acad Sci. 1985;82(16):5490-5494.
11. Åstedt B, Lecander I, Brodin T, Lundblad A, Löw K. Purification of a specific placental plasminogen activator inhibitor by monoclonal antibody and its complex formation with plasminogen activator. Thromb Haemost. 1985;53(01):122-125.
12. Clezardin P, McGregor JL, Manach M, Boukerche H, Dechevanne M. One-step procedure for the rapid isolation of mouse monoclonal antibodies and their antigen binding fragments by fast protein liquid chromatography on a mono Q anion-exchange column. J Chromatogr A. 1985;319:67-77.
13. Stachel SE, Messens E, Van Montagu M, Zambryski P. Identification of the signal molecules produced by wounded plant cells that activate T-DNA transfer in Agrobacterium tumefaciens. Nature. 1985;318(6047):624-629.
14. Ikuta K, Takami M, Kim CW, et al. Human lymphocyte Fc receptor for IgE: sequence homology of its cloned cDNA with animal lectins. Proc Natl Acad Sci. 1987;84(3):819-823.
15. Hawlitschek G, Schneider H, Schmidt B, Tropschug M, Hartl FU, Neupert W. Mitochondrial protein import: identification of processing peptidase and of PEP, a processing enhancing protein. Cell. 1988;53(5):795-806.
16. Macmillan AM, Verdine GL. Engineering tethered DNA molecules by the convertible nucleoside approach. Tetrahedron. 1991;47(14-15):2603-2616.
17. Van Noorden R. Structural biology bags chemistry prize. Nature. 2009;461(7266):860. doi:10.1038/461860a
18. Ramakrishnan V, Moore PB. Atomic structures at last: the ribosome in 2000. Curr Opin Struct Biol. 2001;11(2):144-154. doi:10.1016/s0959-440x(00)00184-6
19. Ada E. Yonath: Interview. Nobel Prize Outreach. Accessed February 4, 2026. https://www.nobelprize.org/prizes/chemistry/2009/yonath/interview/
20. Doyle DA, Lee A, Lewis J, Kim E, Sheng M, MacKinnon R. Crystal structures of a complexed and peptide-free membrane protein–binding domain: molecular basis of peptide recognition by PDZ. Cell. 1996;85(7):1067-1076.
21. Robinson PJ, Trnka MJ, Pellarin R, et al. Molecular architecture of the yeast Mediator complex. Elife. 2015;4:e08719.
22. Dhe-Paganon S, Shigeta R, Chi YI, Ristow M, Shoelson SE. Crystal structure of human frataxin. J Biol Chem. 2000;275(40):30753-30756.
23. Love RA, Parge HE, Wickersham JA, et al. The crystal structure of hepatitis C virus NS3 proteinase reveals a trypsin-like fold and a structural zinc binding site. Cell. 1996;87(2):331-342.
24. Dong C, Huang F, Deng H, et al. Crystal structure and mechanism of a bacterial fluorinating enzyme. Nature. 2004;427(6974):561-565.
25. Gibney E, Van Noorden R, Ledford H, Castelvecchi D, Warren M. “Test-tube” evolution wins chemistry Nobel Prize.Nature. 2018;562(7726):176-176. doi:https://doi.org/10.1038/d41586-018-06753-y
26. Kan SJ, Huang X, Gumulya Y, Chen K, Arnold FH. Genetically programmed chiral organoborane synthesis. Nature. 2017;552(7683):132-136.
27. Buller AR, Brinkmann-Chen S, Romney DK, Herger M, Murciano-Calles J, Arnold FH. Directed evolution of the tryptophan synthase β-subunit for stand-alone function recapitulates allosteric activation. Proc Natl Acad Sci. 2015;112(47):14599-14604.
28. Coelho PS, Brustad EM, Kannan A, Arnold FH. Olefin cyclopropanation via carbene transfer catalyzed by engineered cytochrome P450 enzymes. Science. 2013;339(6117):307-310.
29. Fonfara I, Le Rhun A, Chylinski K, et al. Phylogeny of Cas9 determines functional exchangeability of dual-RNA and Cas9 among orthologous type II CRISPR-Cas systems. Nucleic Acids Res. 2014;42(4):2577-2590.
30. Knott GJ, East-Seletsky A, Cofsky JC, et al. Guide-bound structures of an RNA-targeting A-cleaving CRISPR–Cas13a enzyme. Nat Struct Mol Biol. 2017;24(10):825-833.
31. Jennifer A. Doudna: Interview. Nobel Prize Outreach 2026. Accessed February 11, 2026. https://www.nobelprize.org/prizes/chemistry/2020/doudna/interview/
32. Okazaki T, Tanaka Y, Nishio R, et al. Autoantibodies against cardiac troponin I are responsible for dilated cardiomyopathy in PD-1-deficient mice. Nat Med. 2003;9(12):1477-1483.
33. Lechmann M, Krooshoop DJ, Dudziak D, et al. The extracellular domain of CD83 inhibits dendritic cell–mediated T cell stimulation and binds to a ligand on dendritic cells. J Exp Med. 2001;194(12):1813-1821.
34. Van Schie KA, Hart MH, De Groot ER, et al. The antibody response against human and chimeric anti-TNF therapeutic antibodies primarily targets the TNF binding region. Ann Rheum Dis. 2015;74(1):311-314.
35. Ryan MC, Kostner H, Gordon KA, et al. Targeting pancreatic and ovarian carcinomas using the auristatin-based anti-CD70 antibody–drug conjugate SGN-75. Br J Cancer. 2010;103(5):676-684.
36. Koopmans I, Hendriks D, Samplonius DF, et al. A novel bispecific antibody for EGFR-directed blockade of the PD-1/PD-L1 immune checkpoint. Oncoimmunology. 2018;7(8):e1466016.
37. Press O, Appelbaum F, Ledbetter J, et al. Monoclonal antibody 1F5 (anti-CD20) serotherapy of human B cell lymphomas.Blood. 1987;69(2):584-591. doi:10.1182/blood.V69.2.584.584
38. Elgundi Z, Sifniotis V, Reslan M, Cruz E, Kayser V. Laboratory Scale Production and Purification of a Therapeutic Antibody. J Vis Exp JoVE. 2017(119):55153. doi:10.3791/55153
39. Zhang C, Röder J, Scherer A, et al. Bispecific antibody-mediated redirection of NKG2D-CAR natural killer cells facilitates dual targeting and enhances antitumor activity. J Immunother Cancer. 2021;9(10):e002980. doi:10.1136/jitc-2021-002980
40. Schwaneberg U, Sprauer A, Schmidt-Dannert C, Schmid RD. P450 monooxygenase in biotechnology: I. Single-step, large-scale purification method for cytochrome P450 BM-3 by anion-exchange chromatography. J Chromatogr A. 1999;848(1):149-159. doi:10.1016/S0021-9673(99)00457-4
41. Cao S, Xu W, Luo Y, et al. Expression, purification and refolding of recombinant Cry1Ab/Ac obtained in Escherichia coli as inclusion bodies. J Sci Food Agric. 2009;89(5):796-801. doi:10.1002/jsfa.3515
42. Winters D, Chu C, Walker K. Automated two-step chromatography using an ÄKTA equipped with in-line dilution capability. J Chromatogr A. 2015;1424:51-58. doi:10.1016/j.chroma.2015.10.092
43. Vogel JH, Nguyen H, Giovannini R, et al. A new large-scale manufacturing platform for complex biopharmaceuticals. Biotechnol Bioeng. 2012;109(12):3049-3058. doi:10.1002/bit.24578
44. Pardi N, Weissman D. Nucleoside modified mRNA vaccines for infectious diseases. in: Kramps T, Elbers K, eds. RNA Vaccines: Methods and Protocols. Springer; 2017:109-121. doi:10.1007/978-1-4939-6481-9_6
45. Karikó K, Muramatsu H, Ludwig J, Weissman D. Generating the optimal mRNA for therapy: HPLC purification eliminates immune activation and improves translation of nucleoside-modified, protein-encoding mRNA. Nucleic Acids Res. 2011;39(21):e142. doi:10.1093/nar/gkr695
46. Pardi N, Tuyishime S, Muramatsu H, et al. Expression kinetics of nucleoside-modified mRNA delivered in lipid nanoparticles to mice by various routes. J Controlled Release. 2015;217:345-351. doi:10.1016/j.jconrel.2015.08.007
47. Baiersdörfer M, Boros G, Muramatsu H, et al. A facile method for the removal of dsRNA contaminant from in vitro-transcribed mRNA. Mol Ther Nucleic Acids. 2019;15:26-35. doi:10.1016/j.omtn.2019.02.018
48. Vázquez Torres S, Benard Valle M, Mackessy SP, et al. De novo designed proteins neutralize lethal snake venom toxins. Nature. 2025;639(8053):225-231. doi:10.1038/s41586-024-08393-x
49. Lisanza SL, Gershon JM, Tipps SWK, et al. Multistate and functional protein design using RoseTTAFold sequence space diffusion. Nat Biotechnol. 2025;43(8):1288-1298. doi:10.1038/s41587-024-02395-w
50. Zambaldi V, La D, Chu AE, et al. De novo design of high-affinity protein binders with AlphaProteo. ArXiv 2409.08022v1. Published September 12, 2024. https://doi.org/10.48550/arXiv.2409.08022. 52.
51. Berman HM, Westbrook J, Feng Z et al. The Protein Data Bank. Nucleic Acids Res. 2000;28(1):235-242. doi:10.1093/nar/28.1.235. http://www.rcsb.org/